RationaleThe rationale for the isol

Rationale
The rationale for the isolation of human p0 cell lines is based on the
use of an inhibitor of mtDNA replication, such as the DNA intercalating
dye ethidium bromide (3,8-diamino-5-ethyl-6-phenylphenanthridinium
bromide), to deplete the cells of their mtDNA. Ethidium bromide was
initially shown to induce in Saccharomyces cerevisiae the formation of
the respiratory-deficient petite phenotype, 3 associated with deletions of the
mtDNA, 4 and was subsequently shown to cause the complete loss of
mtDNA in treated yeast cellsP '6 Ethidium bromide has also been shown
to have effects on mammalian mtDNA replication. Relatively low concentrations
of ethidium bromide (0.1 to 2/~g/ml) result in either partial or
complete inhibition of mtDNA replication, but have no effect on the replication
of nuclear DNA. 7-1° Wiseman and Attardi u demonstrated that even
very low levels of ethidium bromide (20 ng/ml) result in nearly complete
inhibition of mtDNA synthesis and reductions in the steady-state levels of DNA in human cell lines. It was observed that the mtDNA content
becomes progressively diluted as the cells continue to divide. Thus, after
n cell doublings, the mtDNA content was reduced by the factor 1/2 n.
In yeast, mitochondrial respiratory chain function is dispensable if the
cells are provided with a fermentable energy source, which allows the
cells to use glycolysis to generate sufficient ATP for cellular functions. In
contrast, mammalian cells are unable to sustain continuous growth in the
presence of ethidium bromide or other inhibitors of mitochondrial gene
expression, even when provided with high levels of glucose. 8'1°-14 An explanation
for this difference in behavior was provided in the late 1970s by
Morais and colleagues, who demonstrated that avian cell lines can become
adapted to grow indefinitely in the presence of ethidium bromide or chloramphenicol
if the medium is supplemented with a source of pyrimidines. 15-17
The requirement for pyrimidines is explained by the fact that dihydrooratate
dehydrogenase, an enzyme in the pyrimidine biosynthetic pathway, is located
in the mitochondrial inner membrane and requires mitochondrial
electron transport for normal function. TM The pyrimidine auxotrophy was
later observed in human p0 cell lines, as shown in Fig. 1A for the cell line
143B206. The growth rate of the wild-type parental cell line 143B.TK- is
not affected by the absence of uridine. In contrast, the 143B206 cell line
undergoes less than one population doubling in the absence of uridine,
whereas its growth rate approaches that of the parental cell line in the
presence of 50/xg/ml uridine.
In addition to their growth

Результаты (русский) 1:

ОбоснованиеОбоснование для изоляции линий клеток человека p0 основывается наИспользование ингибитор репликации митохондриальной ДНК, таких как вставочный ДНКкраситель (3,8-diamino-5-ethyl-6-phenylphenanthridinium бромид ethidiumбромид), разрушать клетки их мтДНК. Бромид ethidium былпоказано, что первоначально вызвать в Saccharomyces cerevisiae образованиеорганов дыхания недостаточным маленькая фенотип, 3, связанные с удалениямтДНК, 4 и впоследствии было показано, что причиной полной потеритакже было показано, мтДНК в бромид Ethidium cellsP ' 6 очищенных дрожжейоказывают воздействие на млекопитающих мтДНК репликации. Относительно низких концентрацияхиз бромид ethidium (0.1-2 / ~ г/мл) привести к либо частичной илиполное ингибирование репликации митохондриальной ДНК, но не влияют на репликациюядерной ДНК. 7-1° Уайзман и Attardi u продемонстрировал, что дажеочень низкий уровень бромид ethidium (20 нг/мл) привести к почти полнойингибирование синтеза митохондриальных и сокращений в стационарном уровнях ДНК в линии клеток человека. Было отмечено, что содержание митохондриальной ДНКстановится постепенно развести как клетки продолжают делить. Таким образом, послеn клеток удвоений, содержание митохондриальной ДНК была снижена на коэффициент 1/2 n.В дрожжи, неприкаянная митохондриальной дыхательной цепи функция есликлетки обеспечиваются источником сбраживаемых энергии, который позволяетклетки используют гликолиз для создания достаточной АТФ для клеточных функций. Вконтраст, клетки млекопитающих способны поддерживать непрерывный рост вприсутствие бромид ethidium или других ингибиторов митохондриальных геноввыражение, даже при условии, с высоким уровнем глюкозы. ° 8'1-14 разъяснениедля этого разница в поведении была представлена в конце 1970-хМораиш и коллег, которые показали, что птичий клеточных линий может статьадаптированы к расти бесконечно присутствии бромид ethidium или хлорамфениколЕсли носитель дополняется источником пиримидинов. 15-17Требование пиримидины объясняется тем, что dihydrooratateдегидрогеназы, фермент в биосинтетические пути пиримидина, расположенв внутренней митохондриальной мембраны и требует митохондриальныхтранспорт электронов для нормальной функции. ТМ auxotrophy пиримидина былпозднее наблюдается в линии клеток человека p0, как показано на рис. 1A для линии клеток143B206. темп роста родительских клеток дикого типа линии 143B.TK - этоне влияет на отсутствие уридина. В противоположность этому 143B206 клетки линиипроходит менее чем одной популяции, удвоение в отсутствие уридина,в то время как темпы роста ее подходы, родительских клеток линии вналичие уридина 50/xg/мл.В дополнение к их роста

Результаты (русский) 2:

Обоснование
Основанием для выделения p0 клеточных линий человека основана на
использовании ингибитора репликации мтДНК, такие как ДНК интеркалирующего
краситель этидий бромид (3,8-диамино-5-этил-6-phenylphenanthridinium
бромид), чтобы истощить клетки их мтДНК. Этидий бромид был
изначально индуцирует в Saccharomyces CEREVISIAE образование
мелкой фенотипа с дефицитом дыхательных 3, связанный с делеции в
мтДНК, 4 и впоследствии было показано, чтобы вызвать полную потерю
мтДНК в обработанной дрожжевой cellsP '6 этидий бромида имеет также Было показано,
оказывать влияние на млекопитающих репликации мтДНК. Относительно низкие концентрации
этилиденбромида (от 0,1 до 2 / ~ г / мл) результат в любом частичном или
полное ингибирование репликации мтДНК, но не имеют никакого влияния на репликацию
ядерной ДНК. 7-1 ° Уайзман и Attardi U показали, что даже
очень низкие уровни этидиумбромидом (20 нг / мл) в результате практически полного
ингибирования синтеза и сокращений мтДНК в стационарных уровней ДНК в клеточных линиях человека. Было обнаружено, что содержание мтДНК
становится постепенно разводили в клетки продолжают делиться. Таким образом, после того, как
п клеточных удвоений, содержание мтДНК была уменьшена на фактор 1/2 п.
У дрожжей митохондриальной функции дыхательной цепи является необязательным, если
клетки снабжены брожению источника энергии, который позволяет
клеткам использовать гликолиз, чтобы генерировать достаточно спс за клеточных функций. В
отличие от этого, клетки млекопитающих не могут выдержать непрерывный рост в
присутствии бромистого этидия или другими ингибиторами митохондриального гена
экспрессии, даже при условии, с высоким уровнем глюкозы. 8'1 ° -14 объяснение
этой разницы в поведении была представлена ​​в конце 1970-х
Мораиш и коллег, которые показали, что птичий клеточные линии могут стать
адаптированы к росту на неопределенный срок в присутствии этилиденбромида или хлорамфеникол
, если среда с добавлением Источник пиримидинов. 15-17
Требование пиримидинов объясняется тем, что dihydrooratate
дегидрогеназы, фермент в пути биосинтеза пиримидинов, находится
в митохондриальной внутренней мембраны митохондрий и требует
переноса электронов для нормального функционирования. ТМ пиримидин ауксотрофность был
впоследствии обнаружен в р0 клеточных линий человека, как показано на фиг. 1A для клеточной линии
143B206. Темпы роста дикого типа родительской линии клеток 143B.TK- в
не пострадавших от отсутствия уридин. В отличие от этого, 143B206 клеточная линия
проходит менее одного удвоения популяции в отсутствие уридина,
в то время как его скорость роста приближается к родительской клеточной линии в
присутствии 50 мкг / мл уридина /.
В дополнение к их росту

Результаты (русский) 3:

Обоснование
обоснование для изоляции правам p0 клеточных линий на основе
с ингибитором mtDNA репликации, таких, как ДНК intercalating
красителя ethidium метила (3,8 -diamino-5-этил-6-phenylphenanthridinium
метила), к истощению клеток их mtDNA. Ethidium метила было
первоначально показано на рисунке, чтобы побудить в целях получения сахаромицетных cerevisiae формирование
дыхательной и Петит фенотип, 3 связан с удалениями в
mtDNA, 4 и впоследствии было показано на рисунке, чтобы привести к полной потере
mtDNA в лечение дрожжи cellsP 6 Ethidium метила также показано на рисунке
по мясу млекопитающих mtDNA репликации. малой концентрации
от ethidium метила (от 0,1 до 2/ ~g/мл) в результате частичного или
полный запрет mtDNA репликации,Но не влияет на репликацию
ядерной ДНК. 7-1° Уайзман и Attardi u свидетельствует о том, что даже
очень низкого уровня ethidium метила (20 нг/мл) привести к почти полной
запрет mtDNA обобщение и сокращений в стабильной уровней ДНК в линий. Было отмечено, что mtDNA content
постепенно растворяется в качестве ячеек по-прежнему разделить. Таким образом, после
n сотовый комплексные кобордизмы, mtDNA содержание было сокращено на коэффициент 1/2 n.
в дрожжи, дыхательной цепи митохондрий функции можно не делать если
ячеек с какой сорт пива варится источник энергии, который позволяет
клетки, чтобы использовать гликолиза достаточно СПС для сотовых телефонов функций. В
контрастность, клетках млекопитающих не в состоянии непрерывного роста в
Присутствие ethidium метила или других ингибиторов митохондрий и гена
выражение, даже в тех случаях, когда высокий уровень глюкозы. 8 ' 1 °-14 объяснение
разницу в поведении была представлена в конце 1970-х годов в
Мораиш и коллегами, которые свидетельствуют о том, что версия для печати линий может стать
адаптированы к расти бесконечно в присутствии ethidium метила или хлорамфеникола
Если носитель, дополнена источник pyrimidines. 15-17
требование о том, чтобы pyrimidines объясняется тем фактом, что dihydrooratate
врожденных пороков способствует, фермент в пиримидина biosynthetic путь, находится
в митохондрий внутреннюю мембрану и требует $митохондрий транспорта электронов на нормальную работу. TM в пиримидина auxotrophy был
замечено в p0 клеточных линий,Как показано на рис. 1A для клеточной линии
143B206. Темпы роста дикой типа родительского клеточной линии 143B. ТЗ-
не сказывается отсутствие uridine. В отличие от этого, 143B206 имеет характеристику "клеточной линии
проходит менее чем одной группы населения удвоение в отсутствие uridine,
в то время как темпы его развития подходов, которые родителей сотовый линии в
присутствие 50/XG/мл uridine.
в дополнение к их росту