Preparing Hybridoma Culture Media f

Preparing Hybridoma Culture Media for Stationary Culture (Refer to Production Batch Record 20136 Hybridoma Culture Medium

3.3.3.1 Remove 100 mL DMEM from the 1000 mL bottle of DMEM.

3.3.3.2 Add 100 mL of Fetal Bovine Serum to the 900 mL of DMEM for a final concentration of 10%.

3.3.3.3 10 mL of 200mM L-Glutamine is added to medium prepared in Section 4.3.2.2 for a final concentration of 2mM of L-Glutamine.

3.3.3.4 10 mL of 100mM MEM Sodium Pyruvate Solution is added to the medium prepared in Section 4.3.2.3 for final concentration of 1 mM of MEM Sodium Pyruvate.

3.3.3.5 1 mL of 50 mg/mL Gentamycin Solution is added to the medium prepared in Section 4.3.2.4 for a final concentration of 50 μg/mL of gentamycin.

3.3.3.6 1 mL of 8 mg/mL Tylosin Solution is added to the medium prepared in Section 4.3.2.5 for a final concentration of 8 mg/L of Tylosin Solution.

3.3.3.7 Record the medium preparation data on WI 20136 Hybridoma Culture
Medium. A copy of the completed record is filed with specific Mouse Hybridoma Cell Culture Record (see each hybridoma culture batch record).

3.3.3.8 Label the prepared medium bottle with PN, LN, Expiration Date (always 2 weeks from date of preparation) and storage conditions (4oC).

3.3.4 Recovering Cells from Liquid Nitrogen Freezer or Frozen cells shipment on dry ice

3.3.4.1 Refer to specific Hybridoma Cell PBR or Receiving Record (RIR).

3.3.4.2 Prewarm culture medium required. Add 5-10 mL or 15 to 20 mL of the warm medium into a sterile 15 mL or 50 mL centrifuge tube respectively.

3.3.4.3 Remove a frozen cryogenic vial containing the desired clone from the
Liquid Nitrogen storage tank and log out this frozen vial on the Cell Line Storage System Form for the specific cell lines. The blank forms of these records are included in SOP 12.05.014, Cell Line Storage System.

3.3.4.4 Quickly thaw the frozen cells in a 37°C water bath. To avoid contamination, maintain the frozen vial in a position so that its lid is always above the surface of the water.

3.3.4.5 When the cells are almost thawed, move the vial to the biological safety cabinet. Wipe the outside of the vial with 70% alcohol. Carefully transfer the cell suspension to a sterile centrifuge tube containing prewarmed hybridoma growth medium labeled with the clone description.

3.3.4.6 Cap the centrifuge tube and spin the cell suspension gently at 1200 rpm for 5 minutes. See SOP 14.02.004 GS-6R Refrigerated Centrifuge for the instruction how to use the centrifuge.

3.3.4.7 Discard the DMSO-containing supernatant into a waste bottle containing 10% bleach solution. Resuspend the cells in proper amount of culture medium in the centrifuge tube.

3.3.4.8 If need to count the cell number, go to step 4.3.4.

3.3.4.9 Transfer the medium into culture flask with proper size and growth medium volume (e.g. use 20 mL culture medium in a T-75 cm2 flask, use 40-50 mL culture medium in a T-150 cm2 flask).

3.3.4.10 Place the culture flask in a 37°C incubator with 5-6% CO2 supplement.

3.3.4.11 Record the recovery data on each Mouse Hybridoma Cell Recovery Record. Refer to specific production batch record.

Результаты (русский) 1:

Подготовка гибридомной культуры средств массовой информации для культуры стационарная (см. для производства пакетной записи 20136 гибридомной питательной среды

3.3.3.1 удалить 100 мл DMEM из 1000 мл бутылки DMEM.

3.3.3.2 добавить 100 мл плода Bovine сыворотки к 900 мл DMEM для конечной концентрации 10%.

3.3.3.3 10 мл 200 мм L-глютамин добавляется к средне подготовленный в разделе 4.3.2.2 для конечной концентрации 2 мм L-глютамина.

3.3.3.4 10 мл 100 мм, MEM натрия пируват раствор добавляется к средне подготовленный в разделе 4.3.2.3 для конечной концентрации 1 мм MEM натрия пируват.

3.3.3.5 1 мл раствора 50 мг/мл гентамицина раствор добавляется к средне подготовленный в разделе 4.3.2.4 для конечной концентрации 50 мкг/мл гентамицина.

3.3.3.6 1 мл, 8 мг/мл Тилозин решение добавляется в средне подготовленный в разделе 4.3.2.5 конечная концентрация 8 мг/л раствора Тилозин.

3.3.3.7 запись средней подготовки данных на WI 20136 гибридомной культуры
средний. Копия завершена запись хранится с конкретной мыши Hybridoma клетки культуры записи (см. Каждая запись партии гибридомной культуры).

3.3.3.8 ярлык подготовленный средний флакон с PN, LN, Дата окончания срока действия (всегда 2 недели от даты составления) и условий хранения (4oC).

3.3.4 восстановление клеток из жидкого азота морозильник или замороженные клетки отгрузки на сухой лед

3.3.4.1 относятся к конкретным Hybridoma клетки PBR или получения записи (RIR).

3.3.4.2 prewarm питательной среды требуется. Добавьте 5-10 мл или 15-20 мл теплой среды в стерильные трубы центрифуги 15 мл или 50 мл соответственно.

3.3.4.3 удалить замороженные криогенных флакон с желаемой клон от
резервуара хранения жидкого азота и выход этот замороженный флакон в форме клеток по линии системы хранения для конкретных клеточных линий. Бланки этих документов включаются в СОП 12.05.014, Система хранения линии клеток.

3.3.4.4 быстро разморозить замороженные клетки в ванну с водой 37° С. Чтобы избежать загрязнения, поддерживать замороженный флакон в состоянии так, что его крышка всегда над поверхностью воды.

3.3.4.5 когда клетки почти растаяло, переместить флакона в биологической безопасности кабинета. Протрите снаружи флакона с 70% спиртом. Тщательно передать стерильных центрифуги трубка, содержащая подогретую гибридомной роста среднего помечены с описанием клон суспензию клеток.

3.3.4.6 крышку трубы центрифуги и спина суспензию клеток аккуратно на 1200 об/мин за 5 минут. См СОП 14.02.004 GS-6R витрины центрифуга для инструкция как пользоваться центрифуги.

3.3.4.7 отменить ДМСО содержащих супернатант в бутылку отходов, содержащих 10% раствор отбеливателя. Ресуспензируйте ячейки в нужное количество питательной среды в трубы центрифуги.

Если 3.3.4.8 нужен для подсчета количества клеток, перейдите к шагу 4.3.4.

3.3.4.9 передачи среды в культуре колбу с нужного размера и роста среднего объема (например использование 20 мл питательной среды в колбе см2 Т-75, Используйте 40-50 мл питательной среды в колбе Т-150 см2).

3.3.4.10 место культуры колбу в инкубаторе 37° C с 5-6% СО2 дополнения.

3.3.4.11 запись восстановления данных на каждой мыши Hybridoma клетки восстановления записи. Обратитесь к конкретные производства пакетной записи.

Результаты (русский) 2:

Подготовка культуральной средой гибридомы для стационарного культуры (Обратитесь к серийному производству Запись 20136 Hybridoma Культура Средний 3.3.3.1 Удалить 100 мл DMEM с мл бутылки DMEM 1000. 3.3.3.2 Добавить 100 мл эмбриональной телячьей сыворотки в 900 мл DMEM для конечная концентрация 10%. 3.3.3.3 10 мл 200 мМ L-глютамин добавляется к среде, приготовленной в разделе 4.3.2.2 в конечной концентрации 2 мМ L-глутамина. 3.3.3.4 10 мл 100 мМ пируват натрия МЕМ раствор добавляют в среде, приготовленной в разделе 4.3.2.3 в конечной концентрации 1 мМ натрий MEM пируват. 3.3.3.5 1 мл 50 мг / мл Гентамицин раствор добавляют к среде, приготовленной в разделе 4.3.2.4 в конечной концентрации 50 мкг / мл гентамицина. 3.3.3.6 1 мл 8 мг / мл Тилозина Решение добавляется в среде, приготовленной в разделе 4.3.2.5 для конечной концентрации 8 мг / л Тилозина решения. 3.3.3.7 записывать данные средние подготовки на WI 20136 Hybridoma Культура Средний. экземпляр заполненной записи подана конкретных мышь Hybridoma культуре клеток Record (см каждый культуры гибридомы пакетный рекорд). 3.3.3.8 Этикетка Готовую среду бутылка с П.Н., Л.Н., истечения срока (всегда 2 недель с Дата составления) и хранения (4 ° С). 3.3.4 восстановления элементов из жидкого азота морозильнике или замороженных клеток отгрузки на сухом льду 3.3.4.1 Обратитесь к конкретной клеток гибридомы PBR или получения Record (РИР). требуется 3.3.4.2 Prewarm культуральной среды . Добавить 5-10 мл или от 15 до 20 мл теплой среды в стерильный 15 мл или 50 мл центрифужные пробирки, соответственно. 3.3.4.3 Удаление замороженного криогенный сосуд, содержащий желаемый клон из резервуара для хранения жидкого азота и выйти из этого замороженную пробирку на клеточной линии Система форма хранения для конкретных клеточных линий. Бланки этих записей включены в SOP 12.05.014, клеточной линии Storage System. 3.3.4.4 Быстро разморозить замороженные клетки в водяной бане при 37 °. Чтобы избежать загрязнения, поддерживать замороженный флакон в таком положении, что его крышка всегда над поверхностью воды. 3.3.4.5 Когда клетки почти оттаивали, переместить флакон в бокс биологической безопасности. Протрите наружную пробирку с 70% спиртом. Тщательно передачи клеточной суспензии в стерильную центрифужную пробирку, содержащую подогретую среду роста гибридомы меченного с описанием клона. 3.3.4.6 Крышка центрифужную пробирку и спин клеточной суспензии осторожно при 1200 оборотах в минуту в течение 5 минут. Смотреть SOP 14.02.004 GS-6R охлаждаемой центрифуге для обучения, как использовать центрифугу. 3.3.4.7 Выбросьте ДМСО-содержащий супернатант в сточных емкость, содержащую 10% гипохлоритом натрия. Ресуспендируют клеток в надлежащем количестве питательной среды в пробирку для центрифугирования. 3.3.4.8 Если потребность подсчитать количество клеток, перейдите к шагу 4.3.4. 3.3.4.9 Передача среды в колбе для культивирования с правильного размера и роста объема средней (например использовать 20 мл культуральной среды в Т-75 см2 колбу, используют 40-50 мл культуральной среды в см2 колбы Т-150). 3.3.4.10 Местонахождение колбу культуры в 37 ° C инкубаторе с 5-6% добавки СО2. 3.3.4.11 Запись данных восстановления на каждой мыши клеток гибридомы Recovery Record. Обратитесь к конкретной партии продукции записи.

Результаты (русский) 3:

8 Обозначение подготовлен средних бачок с PN, LN, дата окончания срока действия (всегда 2 недель с даты подготовки) и условия хранения 4oC).

3.3.4 Восстановление клеток из жидкого азота морозильной камеры или замороженных клеток отгрузки по сухой лед

3.3.4.1 ссылки на конкретные Hybridoma сотовый PBR или получает запись (RIR).

3.3.4.2 время прогрева культуры среднего.Подготовке Hybridoma культура средства массовой информации для стационарного культуры (см. партии запись 20136 Hybridoma культуры среднего

3.3.3.1 способные выдавать навигационную информацию на скоростях удалить 100 мл DMEM с 1000 мл флакон DMEM.

3.3.3.2 добавить 100 мл говядины плода сыворотки в 900 мл DMEM на окончательный концентрации 10 %.

3.3.3.3 10 мл 200мм L-Glutamine добавляется в средних подготовлен в разделе 4.3.2 .2 Для окончательной концентрации 2мм L-Glutamine .

3.3.3.4 . 10 мл 100мм MEM Pyruvate натрия раствор добавляется в средних подготовлен в разделе 4.3.2.3 для окончательной концентрации 1 мм MEM Pyruvate натрия.

3.3.3.5 1 мл 50 мг/мл гентамицина решение будет добавлен в средних подготовлен в разделе 4.3.2.4 для окончательной концентрации 50 мкг/мл гентамицина.

3.3.3 .6 1 мл от 8 мг/мл тилозина решение будет добавлен в средних подготовлен в разделе 4.3.2.5 для окончательной концентрации 8 мг/л тилозина решения.

3.3.3.7 записи средних подготовки данных по WI 20136 Hybridoma культуры
средних. Копию завершена запись будет подана в конкретных мышь Hybridoma культуры клеток запись (см. Каждый hybridoma культуры пакетной записи).

3.3.3 .8 Обозначение подготовлен средних бачок с PN, LN, дата окончания срока действия (всегда 2 недель с даты подготовки) и условия хранения 4oC).

3.3.4 Восстановление клеток из жидкого азота морозильной камеры или замороженных клеток отгрузки по сухой лед

3.3.4.1 ссылки на конкретные Hybridoma сотовый PBR или получает запись (RIR).

3.3.4.2 время прогрева культуры среднего.клеточной линии системы хранения данных.

3.3.4.4 быстро оттаивания замороженных клеток в 37 °C водой. Для того, чтобы избежать загрязнения, поддерживать замороженных склянку в состоянии так, что его крышка всегда выше поверхности воды.

3.3.4.5 При ячеек почти после разморозки, переместите склянку с биологической безопасности кабинета. Протрите наружную поверхность склянку с 70% спирта.Добавить 5-10 мл или от 15 до 20 мл теплой средней в бесплодные 15 мл или 50 мл центрифуга трубки соответственно.

3.3.4.3 . Изучение межсетевых снимите замерзший криогенных склянку крышкой нужный клон от
жидкого азота бак для хранения и выйти из системы это замороженные склянку с клеточной линии системы хранения данных для конкретных линий. В пустых форм этих записей, включены в SOP 05.12.014 ,Осторожно передачи сотового подвеска в бесплодные трубки центрифуг содержащий prewarmed hybridoma роста средних с маркировкой с clone описание.

3.3.4.6 на с головкой трубки обогащения методом центрифугирования и проверните элемента подвески осторожно на скорости 1200 об/мин в течение 5 минут. См. раздел SOP 14.02.004 GS-6R охлажденных центрифуга для инструкции о порядке использования газовых центрифуг.

3.3.4 .7 Утилизируйте DMSO-содержащие лишнюю в флакона для отходов содержит 10% отбеливателя решения. Resuspend ячеек в нужное количество культуры среднего в центрифугу трубки.

3.3.4.8 если нужно рассчитывать на мобильный телефон, перейдите к пункту 4.3.4

3.3.4.9 перевод в культуре Flask с правильного размера и роста среднего объема (например, использование 20 мл культура средних T-75 см2, FlaskИспользуйте 40-50 мл культура средних T- 150 см2, Flask).

3.3.4.10 место культуры Бродского в 37 °C инкубатор с 5-6% CO2 дополнение.

3.3.4.11 запись восстановление данных на каждом мышь Hybridoma сотовый запись восстановления. Ссылки на конкретные партии запись.