Next, we queried whether CD35 also

Next, we queried whether CD35 also mediates infection, or whether EBV might be irreversibly tethered to the cell surface by CD35 (a rigid protein), or be phagocytosed and destroyed. Nalm6 CD35, Nalm6 CD21, Nalm6, and control lines were incubated with EBfaV-GFP (a variant B958 strain that expresses EGFP from the viral genome after infection) and analyzed by microscopy at 18, 36, 72, and 96 hr postinfection. By 72 hr, Nalm6 CD21, Raji (CD21+ CD35−, EBV+ Burkitt lymphoma [BL] line susceptible to EBV “superinfection”), and also Nalm6 CD35 became infected with EBfaV-GFP, as shown by fluorescence (Figure 3A). The time course of infection via CD21 compared with CD35 was distinct: fluorescent cells first appeared at ∼18 hr in Nalm6 CD21 but were not visible until ∼36 hr after Nalm6 CD35 was incubated with EBV (data not shown). Although the relative receptor density of CD35 and CD21 may have varied in some assays, delayed fluorescence of CD35-expressing cells was consistent in multiple experiments. Sorting EGFP-expressing cells enabled establishment of stable lines that grew well and were further evaluated after 6 months (Figure 3B). We reliably detected EBV latent membrane protein 1 (LMP1) in these cells by IB (Figure 3C), whether they originated from Nalm6 CD21 or CD35 lines, documenting persistent infection. Interestingly, whereas CD21 expression was retained in infected Nalm6 CD21 cells, CD35 expression could not be detected after stable infection of Nalm6 CD35 lines, an observation we will return to (Figure 3C, bottom).

Despite EBV binding, neither K562 CD21 nor CD35 expressed EGFP after incubation (data not shown). K562, unlike Nalm6, lacks HLA II, the lymphocyte coreceptor and only known cellular ligand for the EBV fusion protein gp42 extensively reviewed in Hutt-Fletcher (2007)) and Shaw et al. (2010)). To assess whether HLA II could also serve as a coreceptor for CD35-expressing cells, dual transfectants were generated as previously reported using transcription factor CIITA (LeibundGut-Landmann et al., 2004) to upregulate HLA II (Li et al., 1997) (Figure 1B). Although neither K562 nor K562+ was susceptible to infection, K562+CD21 (control), K562+CD35, and K562+CD21/CD35 were all readily infected as shown by visualization of EGFP (Figure 3D). Moreover, preincubation of EBV with mAb F-2-1 directed to gp42, but not with an isotype control Ab, blocked infection of HLA II+ Nalm6 CD35 cells (Figure 3E).

Результаты (русский) 1:

Далее, мы запрашиваются ли CD35 также опосредует инфекции, или ли EBV может быть необратимо привязаны к поверхности клетки, CD35 (жесткой белок), или phagocytosed и уничтожены. Nalm6 CD35, Nalm6 CD21, Nalm6 и линии контроля были инкубировали с EBfaV-GFP (вариант B958 штамм, который выражает EGFP от вирусного генома после заражения) и проанализированы микроскопии в 18, 36, 72 и 96 ч postinfection. На 72 часа Nalm6 CD21, Раджи (CD21 + CD35−, EBV + Беркитта лимфома [BL] линия восприимчивы к EBV «суперинфекции»), а также Nalm6 CD35 заразились EBfaV-GFP, как показано на флуоресценции (рис. 3а). Время курс инфекции через CD21, по сравнению с CD35 отличается: флуоресцентные клетки впервые появилась на ∼18 hr в Nalm6 CD21, но не были видны до ∼36 hr после Nalm6 CD35 был инкубировали с EBV (данные не показаны). Хотя плотность относительной рецептор CD35 и CD21 может варьировались в некоторых анализов, задержки флуоресценции клеток, выражая CD35 согласуется в нескольких экспериментах. Сортировка EGFP-выражая клеток позволило создание стабильной линии, которые росли хорошо и были также оценены после 6 месяцев (рис. 3B). Мы надежно обнаружено EBV латентной мембранный белок 1 (LMP1) в этих клетках, IB (рис. 3 c), ли они возникли от Nalm6 CD21 или CD35 линий, документирование персистирующей инфекции. Интересно, что тогда как выражение CD21 была сохранена в инфицированных клеток Nalm6 CD21, CD35 выражения не могут быть обнаружены после стабильного инфекции Nalm6 CD35 линии, наблюдения мы вернемся к (рис. 3 C, снизу).Несмотря на EBV привязки, K562 CD21 ни CD35 выразили EGFP после инкубации (данные не показаны). K562, в отличие от Nalm6, отсутствуют HLA II, лимфоцитов coreceptor и только известных сотовых лигандом для EBV синтеза белка gp42 подробно рассмотрены в Хатт-Флетчер (2007)) и Shaw et al. (2010)). Оценить ли HLA II может также служить coreceptor для выражения CD35 клетки, двойной transfectants были созданы, как сообщалось ранее с помощью транскрипции фактором CIITA (LeibundGut-Landmann et al., 2004) upregulate HLA II (Li et al., 1997) (рис. 1B). Хотя K562 ни K562 + восприимчивы к инфекции, K562 + CD21 (контроль), K562 + CD35 и K562 + CD21/CD35 легко заражаются как показано по визуализации EGFP (рис. 3D). Кроме того preincubation EBV с МАБ F-2-1 направлено на gp42, но не с элементом управления изотипа Ab, заблокирован инфекции HLA II + Nalm6 CD35 клеток (рис. 3E).

Результаты (русский) 2:

Далее, мы запрашивается ли также опосредует инфекцию CD35, или является ли EBV может быть необратимо привязаны к клеточной поверхности CD35 путем (жесткий белок), или быть фагоцитированы и уничтожены. Nalm6 CD35, CD21 Nalm6, Nalm6, и управляющие линии инкубировали с EBfaV-GFP (в B958 штамма вариант, который выражает EGFP из вирусного генома после заражения) и анализировали с помощью микроскопии в 18, 36, 72 и 96 ч постинфекционной. К 72 ч, Nalm6 CD21, Раджи (CD21 + CD35-, EBV + Беркитта лимфома [BL] линии чувствительны к EBV "суперинфекции"), а также Nalm6 CD35 заразились EBfaV-GFP, как показано с помощью флуоресцентной (рис 3А). Время хода инфекции через CD21 по сравнению с CD35 отличался: люминесцентные клетки впервые появился на ~ 18 ч в Nalm6 CD21, но не были видны до ~36 ч после Nalm6 CD35 не выдерживают с EBV (данные не представлены). Хотя относительная плотность рецептора CD35 и CD21 может иметь разнообразный в некоторых анализов, замедленная флуоресценция CD35-экспрессирующих клеток была последовательна в нескольких экспериментах. Сортировка EGFP-экспрессирующие клетки позволило создание стабильных линий, которые росли хорошо и были в дальнейшем оценены после 6 месяцев (Рисунок 3В). Мы надежно обнаружить EBV латентный мембранный белок 1 (LMP1) в этих клетках с помощью IB (рис 3C), возникла ли они от Nalm6 CD21 или CD35 линий, документирования хроническую инфекцию. Интересно, что в то время как выражение CD21 сохранялась в инфицированных клетках Nalm6 CD21, выражение CD35 может не быть обнаружен после стабильного заражения Nalm6 CD35 линий, наблюдение мы вернемся к (рис 3C, внизу). Несмотря EBV обязательным, ни K562 CD21, ни CD35 выразил EGFP после инкубации (данные не показаны). K562, в отличие от Nalm6, не хватает HLA II, в корецептора лимфоцитов и только известный сотовый лиганд для EBV GP42 слитого белка широко рассмотрены в Хатт-Флетчер (2007)) и Шоу и др. (2010)). Чтобы оценить, может ли HLA II также служить в качестве корецептора для CD35-экспрессирующих клеток, были получены двойные трансфектанты, как сообщалось ранее, используя фактор транскрипции CIITA (LeibundGut-LANDMANN и соавт., 2004), чтобы положительно регулировать HLA II (Li и др., 1997) (Фигура 1В). Хотя ни K562, ни K562 + был восприимчивы к инфекции, К562 + CD21 (контроль), К562 + CD35, и К562 + CD21 / CD35 были все легко заразиться, как показано на визуализации EGFP (рис 3D). Более того, предварительное инкубирование из EBV с мАт F-2-1 направлено на GP42, но не с контролем изотипа Ab, заблокирован инфекции HLA II + Nalm6 CD35 клеток (фиг 3e).

Результаты (русский) 3:

Далее, мы задали вопрос о том, имеются ли CD35 также организует инфекции, или же морфологически может быть безвозвратно привязанная к ячейке поверхность, CD35 (жесткой белка), или быть phagocytosed и уничтожены. Nalm6 CD35, Nalm6 CD21, Nalm6 и линии управления были побежден без установления мира с EBfaV-упрощения процедур торговли (в варианте B958 нагрузки, которую выражает EGFP от вирусного генома человека после заражения) и проанализированы микроскопии на 18, 36, 72,И 96 hr postinfection. 72 HR, Nalm6 CD21, Мурафия векилляринин хекайети (CD21 CD35-, морфологически лимфома Burkitt [BL] линии подвержены морфологически "superinfection" ), а также Nalm6 CD35 инфицированных EBfaV-упрощения процедур торговли, как показано на рисунке, флюоресценция (см. рис. 3A). Время конечно же инфекции через CD21 по сравнению с CD35 отличается:Флуоресцентный клеток впервые появилась на ∼18 hr в Nalm6 CD21 но не отображаются, пока ∼36 hr после Nalm6 CD35 был побежден без установления мира с морфологически (данные не показано на рисунке). Несмотря на то, что относительное приемника изображения плотности CD35 и CD21 мая, в некоторых случаях Тапи, задержка флюоресценция CD35-выражая ячейки последовательно несколько экспериментов.Сортировка EGFP-выражая ячеек включено создание стабильной линии, вырос и дальнейшую оценку после 6 месяцев (Рисунок 3В). Мы надежно обнаружены морфологически скрытое мембранные белки 1 (LMP1) в этих камерах, IB (рис. 3C), будь они исходили от Nalm6 CD21 и CD35 линии, документирование стойких инфекций. Что интересно,В то время как CD21 выражение было сохранено в зараженных Nalm6 CD21 клеток, компакт-диск CD35 выражение не может быть обнаружена после стабильного заражения Nalm6 CD35 линий, мы (рис. 3C, внизу) .ветровому несмотря на лимфоцитах обязательную юридическую силу, ни K562 CD21 и CD35 выразил EGFP после инкубаторов (данные не показано на рисунке). K562, в отличие от Nalm6, не хватает Хла II,Свежим незрелым coreceptor и только известные сотовые активаторов для морфологически fusion белка gp42 подробно рассмотрены в Hutt-Fletcher (2007 г.)) и шоу et al. (2010 г. )). Для оценки того, является ли Хла II, может также служить в качестве coreceptor для CD35-выражая ячеек, двойной transfectants генерируются как сообщалось ранее с помощью коэффициента преобразования CIITA (LEIBUNDGUT-LANDMANN et al. ,2004 г.) на upregulate Хла II (Li et al. , 1997) (рисунок 1B). Хотя ни K562 и K562 были подвержены инфекции, K562 CD21 (управление), K562 CD35, и K562 CD21/CD35 были все легко инфицированных как показано на рисунке, визуализация EGFP (рис. 3D). Кроме того, из preincubation лимфоцитах с MAB F-2-1 направлены на GP42, но не с isotype контроль ab,Заблокирован заражения Хла II Nalm6 CD35 клеток (см. рис. 3E).